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.. 染色或色素试验(DT) 本法是弓形体所独有的免疫反应。其原理是因新鲜活弓形体极易被美蓝着色,当加入含有辅助因子(AF)的新鲜人体血清,可促使抗体和虫体细胞浆发生作用而引起胞浆变性,变性的虫体胞浆不能被碱性美蓝所着色。利用这种现象可以间接地测定感染弓形体后犬体内抗体的含量。本法具有敏感性高、特异性强、出现早、消失慢等特点,适用于感染初期的犬生前诊断。()抗原的制备:用注射器先抽取 ml生理盐水,再抽取接种过弓形体~天后的小鼠腹腔液,离心 00 r/min min,弃去上清液,在离心管中再注入 ml生理盐水,再离心一次取沉淀物,在每份沉淀物中(每只小鼠的腹水沉淀物为份)加入 ml生理盐水制成悬浮液,再加入含有AF的新鲜正常人体血清 ml充分混合成。由于AF不耐高温,故保存时应注意温度。()碱性美蓝酒精饱和液的制备:甲溶液:碱性美蓝(含色素90%)0. g;9%酒精0 ml;混合后置于乳钵中充分研磨溶解。乙溶液:氢氧化钾(0.0%)00 ml。将甲、乙二液充分混合后即成碱性美蓝酒精饱和溶液原液,备用。此液在临用前以硼酸缓冲液∶0稀释。()操作:先将被检血清作倍稀释,℃水浴灭能0 min,再以生理盐水作倍的连续稀释至∶ 8倍(第一管)为止,每菅中余下被稀释的血清量为0. ml;阳性对照血清亦按同样方法处理后余下0. ml。然后每管加入生理盐水0. ml和标记的抗原(虫体加含AF的人体血清)0. ml,充分混合后置于7℃水浴感作0 min,取出后用水冷却,每管加入0倍稀释的碱性美蓝酒精液0. ml,充分混匀,经~0 min后每管各取滴于载玻片上,加盖玻片后以00倍显微镜下观察,统计被碱性美蓝酒精饱和
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